تخليق الببتيد الصعب والكاره للماء

تركيب الببتيد الصعب|تخصيص الببتيد الكاره للماء|تركيب الببتيد الصعب|تجميع تسلسل الكتلة|العلوم-الببتيد

تسلسل الببتيد مسعور جدا؟ تجميع بسهولة؟ أزواج متعددة من سندات ثاني كبريتيد؟ العلوم-خدمات تخليق الببتيد الصعبة وتخليق الببتيد الكارهة للماء متخصصة في جميع أنواع "لا يمكن إنجازها". 20 سنوات من الخبرة، وأنظمة المذيبات الخاصة، والتسليم المستقر. لا تتردد في الاتصال بنا.

ما هو نوع الببتيدات التي تعتبر "صعبة"؟
بعد أن عملت في مجال تصنيع الببتيد لمدة 20 عامًا، رأيت جميع أنواع الببتيدات الصعبة. عندما يأتي العملاء إلينا، يكونون قد سألوا بالفعل العديد من الشركات، والإجابة التي يحصلون عليها هي إما "لا أستطيع القيام بذلك" أو "جربه، لا يوجد ضمان".

الببتيد ذو الكارهة للماء القوية: منطقة الغشاء، الببتيد الإشارة، الحمض الأميني الكاره للماء، عند تصنيعه، سيتم تجميعه معًا على الراتنج، ولن يتمكن الحمض الأميني الذي يقف خلفه من الدخول.
الببتيدات التي يتم تجميعها بسهولة، مثل الأميلويد والببتيدات المضادة للميكروبات، تتراكم عند تصنيعها وتسد العمود عند تنقيتها.
الببتيدات التي تحتوي على أزواج متعددة من روابط ثاني كبريتيد: أكثر من ثلاثة أزواج، خطوة واحدة خاطئة في ترتيب الاقتران ويتم تدمير الجزيء بأكمله.
الببتيد الطويل: أكثر من 60 حمض أميني، في كل خطوة من المحصول يتناقص، وفي النهاية لم يبق شيء.
مزيج معقد من التعديلات: الفسفرة، والتألق، والدورة، والظروف التي تتقاتل مع بعضها البعض.
يمكننا أن نأخذهم جميعًا، والأمر ليس "محاولة"، بل "لديك خطة".

1. الببتيدات الكارهة للماء: ذات أنظمة مذيبة متخصصة
تكمن صعوبة الببتيدات الكارهة للماء في حقيقة أنها لا يمكن إذابتها في المذيبات التقليدية، وعند تصنيعها، "تتكتل سلسلة الببتيد معًا" على الراتنج، مما يجعل من المستحيل دخول الأحماض الأمينية التي تقف خلفها.

الحل لدينا:
مجموعة مذيبات خاصة: نظام مختلط DMF، NMP، DCM، بالإضافة إلى القليل من عامل إطلاق السائل، بحيث يتم الحفاظ على سلسلة الببتيد ممتدة.
تحسين درجة الحرارة: بعض التفاعلات تكون أفضل عند 40 درجة من درجة حرارة الغرفة، وبعضها يجب خفضها إلى 0 درجة، وقد جربناها واحدة تلو الأخرى.
اختيار الراتنج: استخدم راتنج عالي الذوبان للببتيدات الكارهة للماء لترك مساحة كافية لسلاسل الببتيد.
الملصقات المذابة: إذا لم تتمكن من ذلك، أضف ملصقًا محبًا للماء واقطعه بعد التركيب.

الحالة الحقيقية: الببتيد عبر الغشاء 35AA، والأحماض الأمينية الكارهة للماء تمثل 70%، ولا يمكن للعميل البحث عن ثلاث شركات. قمنا بتغيير نظام المذيبات وأضفنا ملصق الإذابة، وفي النهاية وصلت نسبة النقاء إلى 92%، وقام العميل بدراسة الهيكل بسلاسة.

2. أزواج متعددة من روابط ثاني كبريتيد: لا حظ، استراتيجية
كلما زاد عدد روابط ثاني كبريتيد، كلما كان من الصعب إقرانها. زوجان جيدان، ولكن ثلاثة أزواج أو أكثر، وخطوة واحدة خاطئة وينتهي كل شيء.
استراتيجيتنا:
الحماية المتعامدة: يمكن فتح Cys وإقرانها بخطوات باستخدام مجموعات حماية مختلفة، مثل Trt وAcm وtBu.
تحسين ظروف الأكسدة: أكسدة الهواء، أكسدة الجلوتاثيون، أكسدة اليود، طرق مختلفة للببتيدات المختلفة.
مراقبة الجودة المتوسطة: بعد كل زوج، خذ عينة لمرض التصلب العصبي المتعدد وتأكد من الاقتران قبل المضي قدمًا.
تأكيد MS/MS (اختياري): التقسيم النهائي-باستخدام قياس الطيف الكتلي الثانوي لمعرفة مكان ارتباط روابط ثنائي الكبريتيد فعليًا.

A real case: A conotoxin peptide containing four pairs of disulfide bonds was rejected by many companies. We designed a four-step oxidation strategy, which took six weeks, and delivered >نقاء 90%، وروابط ثاني كبريتيد مقترنة بشكل صحيح، وتم حل البنية البلورية لاحقًا من قبل العميل.

3. تجميع الببتيدات المعرضة للتجميع-: التوليف أثناء الدفاع
تحب بعض الببتيدات بشكل طبيعي التجمع، مثل بروتين الأميلويد والببتيد المضاد للبكتيريا. فهي تبدأ في التجمع عندما يتم تصنيعها، وتسد العمود عندما يتم تنقيتها، ولا يمكن إذابتها عندما تكون في متناول اليد.
الحل لدينا:
البرولين الكاذب: يتم إدخال الكاذب برولين في موضع Ser/Thr لتعطيل ميل التجميع والتغيير مرة أخرى بعد التوليف.
التوليف القطاعي: يتم تقطيع الببتيدات شديدة البلمرة إلى عدة أجزاء ويتم تصنيعها بشكل منفصل، ثم يتم إعادة توصيلها في النهاية.
تحسين ظروف التنقية: درجة الحرارة المرتفعة، ودرجة الحموضة الحمضية، وإضافة المذيبات العضوية للعثور على الظروف التي تجعله غير -بلمريًا.

4. مجموعات معدلة معقدة: ظروف بدون معارك
بعض الببتيدات لها متطلبات متعددة: الفسفرة، ووضع العلامات الفلورية، والتدوير. قد تتعارض هذه التعديلات مع بعضها البعض - على سبيل المثال، الفسفرة كارهة للحمض -، ووضع العلامات الفلورية كارهة للضوء -، والتدوير يتطلب درجة حموضة معينة.
نهجنا:
تصميم استراتيجية الحفظ: أي القطع يجب القيام به أولاً، وأي القطع يجب القيام به لاحقًا، تم تصميمه مسبقًا.
الشروط المتعامدة: لا تؤثر شروط كل خطوة من خطوات التفاعل على التعديلات التي تم إجراؤها بالفعل.
مراقبة الجودة المتوسطة: بعد كل خطوة من خطوات التعديل، قم بأخذ عينة للتأكد من أنها تمت بشكل صحيح قبل المضي قدمًا.

5. الطهارة: على حسب ما تفعل به

ويرافق كل ببتيد تقرير HPLC وMS، مما يجعل بيانات النقاء شفافة.

1. لقد كنا نفعل هذا لمدة 20 عاما
إن تخليق الببتيد الصعب ليس شيئًا يمكن لأي شخص القيام به. على مر السنين، تعاملنا مع الكثير من الببتيدات الصعبة: بروتينات الغشاء، وببتيدات الاندماج الفيروسي، والسموم الكونوتية، وبروتينات الأميلويد، والببتيدات المضادة للميكروبات، وما إلى ذلك. لدينا فكرة جيدة عن التسلسلات المعرضة للمشاكل، وما هي الظروف القادرة على إنقاذها. على الأقل ليس عليك تجربة كل واحدة منها إذا أتيت إلينا لإجراء عملية تصنيع الببتيد الصعبة والكارهة للماء.

2. إنها ليست "حاول"، بل "لديك برنامج".
تتعامل الكثير من الشركات مع الببتيدات الصعبة وتقول: "سنجربها، لكننا لا نضمن ذلك". نحن لا نلعب بهذه الطريقة. قبل قبول الطلب، سنقوم بتقييم التسلسل، وما هي نسبة الأحماض الأمينية الكارهة للماء، وما إذا كان هناك أي اتجاه تجميع معروف، وعدد أزواج روابط ثاني كبريتيد، وما إذا كان التعديل معقدًا أم لا. بعد التقييم سنخبرك: ما هي نسبة النجاح وما هي مدة الدورة؟

نحن لا نتلقى أوامر لا يمكن تنفيذها، وعلينا أن نسلم الأوامر التي أخذناها.

3. أنظمة المذيبات المتخصصة للكارهة للماء
الببتيد الكاره للماء هو نقطة قوتنا. إذا لم يكن من الممكن إذابة المذيب التقليدي، فسنقوم بتغيير المذيب؛ إذا لم تتفاعل درجة الحرارة التقليدية، فسنقوم بضبط درجة الحرارة؛ إذا لم يصمد الراتينج التقليدي، فسنقوم بتغيير الراتينج. هناك أيضًا علامة الذوبان كمخرج خلفي.

4. أزواج متعددة من روابط ثاني كبريتيد، خطوة-بخطوة-خطوة
إذا كان هناك أكثر من ثلاثة أزواج من روابط ثاني كبريتيد، فسوف نتبع نهجًا خطوة بخطوة-خطوة بخطوة: الخطوة الأولى هي حماية A وفتح الزوج الأول؛ حماية B وفتح الزوج الثاني؛ حماية C وفتح الزوج الثالث. بعد كل خطوة، نقوم بأخذ عينات لمرض التصلب العصبي المتعدد ونؤكد الاقتران قبل المضي قدمًا. أخيرًا، سيتم كسر MS/MS والتحقق منه، وسيتم تقديم البيانات لك دون تخمينك.

5. مراقبة الجودة: البيانات في كل خطوة
يجب أن تكون مراقبة جودة الببتيدات الصعبة أكثر حذراً:
مراقبة الجودة المتوسطة: بعد كل جزء وكل خطوة من خطوات التعديل، قم بقياس النقاء والوزن الجزيئي أولاً.
المنتج النهائي: HPLC للنقاء، MS للوزن الجزيئي.
اختبار الذوبان: قم بتوفير المذيبات وطرق الذوبان الموصى بها، حتى لا تحصل على الببتيدات التي لا تذوب.
عند إجراء عملية تصنيع الببتيد الصعبة والكارهة للماء، فإن البيانات تتحدث عن نفسها، ويمكن تتبع كل خطوة.

• شكل التسليم: مسحوق مجفف بالتجميد، أنابيب أو قوارير الطرد المركزي.
• المستندات المصاحبة: شهادة توثيق البرامج (ملف تعريف HPLC + طيف MS)، تقرير تجميعي (اختياري).
• الاختبارات الاختيارية: محتوى الببتيد، السموم الداخلية، الرطوبة، تكوين الأحماض الأمينية، اختبار الذوبان.
• التعبئة المخصصة: التقسيم ووضع العلامات وفقًا لمتطلباتك.
• تتم مراجعة كل منتج من منتجات تصنيع الببتيد الصعبة والكارهة للماء للتأكد من صحة التسلسل وأن النقاء يصل إلى المستوى القياسي قبل إرساله.

سواء تم رفضك من قبل الآخرين، أو لم تتمكن من القيام بذلك في مختبرك الخاص، يمكنك التحدث إلينا. إذا كنت تبحث عن الببتيد-العلمي لإجراء عملية تركيب الببتيد الصعبة والكارهة للماء، فلن تضطر على الأقل إلى تجربة واحدة تلو الأخرى.

أريدك أن تقول لي:
تسلسل الببتيد (أو معلومات الهدف)
هل كان لديك أي شخص آخر يفعل ذلك من قبل؟ ما هي النتيجة؟
كم (مليجرام)
متطلبات النقاء

متى تريد ذلك؟

نقدم لك تقييم الجدوى وعرض أسعار البرنامج في غضون 24 ساعة.