تخليق الببتيد الطويل (ما يصل إلى 189 حمضًا أمينيًا)

تخليق الببتيد الطويل|تخصيص الببتيد ذو السلسلة الطويلة|تركيب الببتيد الصعب|الببتيدات أكثر من 50mer|العلوم-الببتيد

هل تحتاج إلى ببتيد طويل يحتوي على أكثر من 50 حمضًا أمينيًا؟ العلوم-تغطي خدمة تصنيع الببتيد الطويل للببتيد ما بين 50 إلى 189 من الأحماض الأمينية، مع استراتيجية تركيب مجزأة، والتغلب على مشاكل التجميع الكاره للماء وانخفاض كفاءة التخليق، وما إلى ذلك . 20 سنوات من الخبرة والتسليم المستقر. مرحبا بكم في الاتصال بنا.

لماذا يصعب صنع الببتيدات الطويلة؟
أي شخص قام بتخليق الببتيد يعرف أن المشكلة تنشأ عندما تكون سلسلة الببتيد طويلة: في حدود 20 حمضًا أمينيًا، تستطيع معظم الشركات القيام بذلك. عندما يتعلق الأمر بأكثر من 40 حمضًا أمينيًا، نبدأ في اختيار التسلسل. عند وجود 60 حمضًا أمينيًا أو أكثر، ينخفض ​​عدد الشركات التي يمكنها تولي المسؤولية بمقدار النصف. عندما يتعلق الأمر بأكثر من 100 حمض أميني، فلا يوجد الكثير من الشركات التي تجرؤ على القيام بذلك.

 

لماذا؟ لأن تخليق الببتيد الطويل يواجه عدة مخاطر:

تنخفض كفاءة التوليف: كل امتداد للحمض الأميني، سيتم خصم العائد مرة واحدة . 30 ببتيد الحمض الأميني، كل خطوة من العائد 99٪، العائد النهائي لا يزال 74٪؛ 60 حمضًا أمينيًا، كل خطوة لا تزال 99%، والعائد النهائي هو 55% فقط. في الواقع، لا يمكن أن يصل العائد من العديد من الخطوات إلى 99٪.
التجميع الكاره للماء: عندما يكون هناك الكثير من الأحماض الأمينية الكارهة للماء في الببتيد الطويل، تبدأ سلسلة الببتيد في "التكتل" على الراتنج، ولا يمكن للأحماض الأمينية الموجودة خلفها الدخول.

صعوبة التنقية: وقت الاحتفاظ بالببتيدات الطويلة والشوائب قريب جدًا من بعضها البعض مما لا يسمح بقطع نظيف.
ضعف الذوبان: عندما يتم الحصول على الببتيد، لا يمكن إذابته، لذلك لا يمكن إجراء التجربة.
لقد مررنا بهذه الحفر من قبل، ونعرف كيفية الالتفاف حولها.

1. الطول: 50-189 حمض أميني

2. استراتيجية التوليف المجزأة
الطريقة الأكثر فعالية للتعامل مع الببتيدات الطويلة هي تقسيمها إلى:
اختيار القطعة: قطع الببتيد الطويل إلى 2-4 أجزاء تحتوي كل منها على 30-60 حمضًا أمينيًا. يجب أن تكون نقطة القطع موجودة في الموضع الذي تكون فيه صعوبة التوليف منخفضة، على سبيل المثال، تجنب المنطقة المستمرة الكارهة للماء.
تركيب الأجزاء: يتم تصنيع كل جزء وتنقيته بشكل فردي إلى درجة نقاء عالية بما فيه الكفاية.
ربط الأجزاء: ضم الأجزاء معًا في محلول أو على راتنج. يمكن أن تكون طريقة الانضمام إما كيميائية طبيعية أو إنزيمية.
الطي: إذا كان الببتيد يحتوي على رابطة ثاني كبريتيد، فيجب طيه إلى الشكل الصحيح بعد الربط.

3. النقاوة: حسب المتطلبات التجريبية

ويرافق كل ببتيد طويل تقرير HPLC وMS، مما يجعل بيانات النقاء شفافة.

4. التعديلات: يمكن للببتيدات الطويلة أيضًا إضافة وظيفة
وضع العلامات الفلورية: FITC، TAMRA، تريد أن ترى أين يمتد الببتيد الطويل.
البيوتين: اسحب- للأسفل أو اختبره.
وضع العلامات النظائرية: من أجل الرنين المغناطيسي النووي أو قياس الطيف الكتلي.
الفسفرة/الجليكوزيل: محاكاة تعديلات ما بعد الترجمة.

1. لقد كنا نفعل هذا لمدة 20 عاما
تخليق الببتيد الطويل ليس شيئًا يمكن لأي شخص القيام به. على مر السنين، تعاملنا مع الكثير من الببتيدات الطويلة: شظايا بروتين الغشاء، وببتيدات الاندماج الفيروسي، وبروتينات الأميلويد، والببتيدات المضادة للميكروبات، وما إلى ذلك. ولدينا فكرة جيدة عن التسلسلات التي يسهل تجميعها، وما هي الظروف التي يمكن أن تنقذها. إذا أتيت إلينا من أجل تصنيع الببتيد الطويل، فلن تضطر على الأقل إلى الدخول إلى الحفرة من البداية.

2. التوليف الجزئي: وليس مجرد التقطيع إلى أجزاء
قد يبدو التقسيم أمرًا بسيطًا، ولكن مكان القطع ومدة كل جزء وكيفية توصيلها كلها أمور مهمة. لدينا عدة مبادئ:
القطع في المنطقة المحبة للماء: تجنب القطع في القلب الكاره للماء، وإلا ستتجمع الأجزاء من تلقاء نفسها.
موازنة طول الأجزاء: لا تجعل تنفيذ جزء واحد صعبًا بشكل خاص والأجزاء الأخرى سهلة بشكل خاص. 3.
اختيار نقطة الاتصال: تتطلب التوصيلات الكيميائية الطبيعية وجود ثيوستر عند الطرف C- وCys عند الطرف N-، والذي يجب تصميمه مسبقًا.

3. الببتيدات الكارهة للماء: نظام مذيب خاص.
بعض الببتيدات الطويلة كارهة للماء لدرجة أنه لا يمكن حلها بواسطة المذيبات التقليدية، لذلك سيتم تجميعها معًا على الراتنج عند تصنيعها. لدينا نظام مذيب خاص ومواد مضافة للحفاظ على تمدد سلسلة الببتيد أثناء عملية التخليق، حتى تتمكن الأحماض الأمينية التالية من الدخول.

4. مراقبة الجودة: البيانات في كل خطوة
تعد مراقبة جودة الببتيدات الطويلة أكثر تعقيدًا من مراقبة جودة الببتيدات القصيرة:
مراقبة جودة المواد الوسيطة: بعد تصنيع كل جزء، قم بقياس النقاء والوزن الجزيئي أولاً، ثم انتقل إلى الخطوة التالية بعد اجتياز الاختبار.
مراقبة عملية الربط: أخذ عينة من تفاعل الاتصال وقياس MS لمعرفة كفاءة الاتصال.
فحص المنتج النهائي: HPLC للنقاء، MS للوزن الجزيئي، MS/MS لتصحيح التسلسل (اختياري).
اختبار الذوبان: قم بتوفير المذيبات وطرق الذوبان الموصى بها، حتى لا تحصل على الببتيدات التي لا تذوب.
عند إجراء عملية تصنيع الببتيد الطويل، تتحدث البيانات عن نفسها ويمكن تتبع كل خطوة.

5. من الملليجرام إلى المائة ملليجرام حتى النهاية
ملليجرام لمرحلة الفحص، وعشرة ملليجرام لمرحلة التحقق من الصحة، ومائة ملليجرام للدراسة الهيكلية - يمكننا أن نأخذها كلها. نفس المشروع، نفس النظير، لا داعي لإعادة -التنسيق.

• التسليم: مسحوق مجفف بالتجميد، وأنابيب أو قوارير الطرد المركزي، محمية بالنيتروجين.
• المستندات المصاحبة: COA (ملف تعريف HPLC + ملف تعريف MS)، MS/MS (تأكيد التسلسل اختياري)، تقرير التوليف (عملية التجزئة والربط).
• الاختبارات الاختيارية: محتوى الببتيد، السموم الداخلية، الرطوبة، تكوين الأحماض الأمينية، اختبار الذوبان.
• التعبئة المخصصة: التقسيم ووضع العلامات وفقًا لمتطلباتك.
• يتم فحص كل منتج من منتجات تصنيع الببتيد الطويل-مضاعفًا للتأكد من صحة التسلسل ومستوى النقاء القياسي قبل إرساله.

سواء كنت تريد الببتيد عبر الغشاء 80aa أو البروتين الفيروسي 150aa، يمكنك التحدث إلينا. إذا طلبت من Science-الببتيد إجراء عملية تصنيع الببتيد الطويل، فلن تضطر على الأقل إلى تجربة واحدة تلو الأخرى.

أريدك أن تقول لي:
تسلسل الببتيد (أو معلومات الهدف)
كم (مليجرام)
متطلبات النقاء
لا تحتوي على روابط ثاني كبريتيد أو تعديلات أخرى

متى تريد ذلك؟

أعطيك تقييم الجدوى والاقتباس في غضون 24 ساعة.